倒置熒光顯微鏡,是指與一般顯微鏡相比,其物鏡、聚光鏡和光源的位置都顛倒過來,由熒光附件與顯微鏡有機結(jié)合構(gòu)成的顯微鏡。激發(fā)光從物鏡向下落射到標本表面,被反射到物鏡中并聚集在樣品上,樣品所產(chǎn)生的熒光以及由物鏡透鏡表面、蓋玻片表面反射的激發(fā)光同時進入物鏡,經(jīng)雙色束分離器使激發(fā)光和熒光分開而成像。物鏡和聚光鏡的工作距離很長,能直接對培養(yǎng)皿中的被檢物體進行顯微觀察和研究。
倒置熒光顯微鏡使用時可能需要的問題有哪些?
1、正確觀察白光的步驟?
將標本置于載物臺上,打開電源開關(guān);將轉(zhuǎn)盤聚光器調(diào)整到明視場,然后將環(huán)狀光闌調(diào)整到z大光圈;從低倍鏡開始觀察。
2、相差環(huán)中BF/PHL/PH2等這些字母到底是什么意思?
倒置熒光顯微鏡本身是結(jié)合了熒光附件和相差顯微鏡的特點。那么在相差環(huán)中的這些字母分別代表了:PHL(4×0.13)、PH1(20×0.45)、PH2(40×0.6)、BF代表的是白光。所以如果我們觀察的是熒光,前三種相差是都可以選擇的。所謂的相差可以理解成是對于透明結(jié)構(gòu)的放大處理,因為細胞本身內(nèi)部結(jié)構(gòu)是透明的,我們想觀察細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)的時候就需要使用相差。
3、無論怎么調(diào)整細準焦螺旋,鏡下的圖像都不清楚?
這種情況下很可能是鏡頭不干凈,可以用酒精棉擦拭一下鏡面。另外高倍數(shù)的物鏡鏡頭外也有一個旋鈕,適當旋轉(zhuǎn)這個旋鈕也會使畫面變得清晰。
4、正確觀察熒光的步驟?
關(guān)閉室內(nèi)的燈光,打開白光電源和汞燈電源,一般汞燈需要提前打開10分鐘預(yù)熱才能達到zui亮;關(guān)閉熒光shutter,用低倍鏡找到細胞位置;關(guān)閉透射光按鈕,打開熒光光路shutter,旋轉(zhuǎn)熒光濾色轉(zhuǎn)盤;電腦顯示器中觀察。
熒光光路shutter要zui后打開,zui先關(guān)閉,這樣可以保護樣本,避免過度的熒光猝滅。
5、如何維護汞燈?
汞燈在工作時會散發(fā)出較大的熱量,因此要保持室內(nèi)溫度不要過高,具有良好的散熱環(huán)境。一個汞燈的工作壽命一般是200個小時,但并不是使用時間越短,觀察的越快,越能延長汞燈的壽命。相反的,如果工作時間越短,反而會讓汞燈壽命減少的越快,所以要盡量減少開關(guān)的次數(shù)。
6、為什么目鏡下觀察到的圖像只有一半兒?
出現(xiàn)這種情況的原因一般是CT環(huán)調(diào)整出現(xiàn)了問題。CT環(huán)位于目鏡下方,也叫合軸調(diào)中目鏡,有CT/O/S三個參數(shù)設(shè)置。CT對應(yīng)的是光路對準了望遠鏡;O對應(yīng)的是光路中沒有物體;S對應(yīng)的是光路中有遮光板。那么上述情況就是CT環(huán)這個螺旋位于CT和S兩個參數(shù)之間。